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质粒构建技术服务项目
一、服务概述
        分子克隆方法所用的载体基于质粒,是一种不依赖基因组 DNA 在细菌内复制的双链游离DNA。用体外重组方法将目的基因插入质粒,形成重组质粒,再通过转化的方式,引入适合的寄主细胞内,进行复制与扩增,然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体,得到重组质粒拷贝,从而获得目的基因的扩增。基于质粒的克隆载体包含几个关键要素:细菌宿主细胞内能有效增殖;质粒含有多克隆位点 (MCS),可插入目的片段;以及载体成功转化后筛选标记。
        作为现代分子生物学研究中的基本手段,质粒构建几乎是每个实验室和大部分实验人员都必须掌握的基本实验技能,应用范围非常广泛。自Cohen1973年构建第一个质粒pSC101以来,克隆载体的种类和用途等都有了很大发展。大部分实验技术人员或经过培训的研究生都能够熟练掌握该项技术。但是,由于质粒构建费时、费力,越来越多的实验室开始将质粒构建等繁琐的工作外包给生物技术公司来完成,以节省时间、提高工作效率。

二、服务内容
1. 设计引物,从克隆载体(或基因组、cDNA模板)上扩增目的基因片段。
2. 处理载体,进行目的基因与载体的连接。
3. 转化连接目的基因的载体,并转化感受态,鉴定阳性质粒。
4. 对连接目的基因的载体进行DNA测序。
5. 将阳性质粒保存菌种,质粒和测序报告提交给客户。
6. 针对客户要求对现有质粒结构进行改造。

三、技术优势
1. 可提供常规质粒载体(包含原核表达、真核表达、慢病毒过表达等):
1)亚克隆载体: pUC19
2TA克隆载体:pEASY
3)原核表达载体:pET-28a (+)
4)真核表达载体:pcDNA3.1 Zeo(+)pcDNA3.1 Neo(-)
5)慢病毒过表达载体:pMSCV-puro
2. 公司已建立了针对质粒严格的工艺标准,包括DNA测序、酶切鉴定、PCR鉴定等;
3. 公司具有完备的技术手段,不仅能够从头拼接质粒,也能够针对客户要求对现有质粒结构进行改造。

四、服务提供图片
1. 菌液PCR结果
1菌液PCR结果
2. 质粒酶切鉴定结果
凝胶模拟结果
实际凝胶电泳结果

3. 质粒测序鉴定结果
质粒测序鉴定结果
4. 质粒图谱
质粒图谱
 
五、服务价格与周期
服务编号 服务项目 价格 服务周期
RS003-1 构建片段≤1.5kb(客户提供载体)   10-15
RS003-2 构建片段>1.5kb,≤3kb(客户提供载体)   10-15
RS003-3 构建片段>3kb(客户提供载体)   咨询
RS003-4 构建片段≤1.5kb(公司提供载体)   10-15
RS003-5 构建片段>1.5kb,≤3kb(公司提供载体)   10-15
RS003-6 构建片段>3kb(公司提供载体)   咨询
RS003-7 亚克隆服务(平末端连接pUC19   10-15
RS003-8 亚克隆服务(连接TA克隆载体)   10-15
RS003-9 设计引物扩增并回收PCR片段(客户提供克隆载体)   10-15
RS003-10 设计引物扩增并回收PCR片段(客户提供cDNA模板)   咨询
 
六、客户须知
1. 客户自带的载体(10-20ug)需提供详细的酶切图谱及相关信息(包括目的基因克隆载体和带连接的载体)。
2. 由于某些基因表达产物会抑制宿主菌生长;因此,我们不保证所有的基因都能够成功克隆并高效表达。
3. 客户请提供载体改造的具体要求,需要改造的质粒(序列经测序验证正确)及其图谱和序列,能够获得所需元件或基因的模板(质粒或其它)及其相关图谱和序列。
4. 对于载体改造和基因片段克隆,客户需要提供载体、PCR产物或酶切产物、以及载体来源及基因背景资料等。