慢病毒包装技术服务项目
一、服务概述
        慢病毒(Lentivirus)是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到良好的基因治疗效果。区别于一般的逆转录病毒,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,因此它可以有效地感染包括神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等在内的几乎所有的哺乳动物细胞,并且感染效率非常高,是传统质粒转染方法的数倍甚至数十倍,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达,是目前最受欢迎的基因治疗和基因修饰细胞治疗研究工具,在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒正在获得越来越广泛的应用。
        默赛尔生物采用第3代重组慢病毒包装系统制备病毒颗粒,该套包装系统具有较高的感染性和安全性能,病毒制备所必需的元件序列被拆分到4个质粒当中,分别是:11个编码目的基因的慢病毒表达质粒;22个包装质粒(pLP1pLP2)。其中一个质粒编码GagPol, 另外一个质粒编码Rev31个编码包膜蛋白的质粒(pLP/VSVG)。将上述质粒共同转染到293T细胞中,即可生产出携带目的基因的重组慢病毒颗粒,也称为自我失活VSV-G假型慢病毒,在保证对目的细胞的高感染能力的同时,也具有更好的安全性。
第三代慢病毒包装辅助质粒示意图
第三代慢病毒结构示意图

二、服务内容
1. 构建慢病毒载体,使用第三代慢病毒包装转染293T细胞。
2. 基因过表达慢病毒的制备;
3. 基因沉默shRNA慢病毒的制备。
4. 病毒纯化,并进行滴度确认。

三、服务优势
1. 采用第三代四质粒包装系统,具有更高的安全性;
2. 获得的慢病毒滴度高,经过浓缩后可提获得滴度≥108TU/mL的慢病毒溶液;
3. 可选择是否带有荧光报告基因(GFPCherry等)和药筛标记基因(PuroNeo等);
4. 慢病毒的生产在cGMP实验室中进行,遵循严格的质量控制标准,确保生产的慢病毒正确可靠。

四、服务示例(以携带PSK2基因的重组慢病毒制备为例)
1PSK2基因慢病毒表达质粒构建
3 pLVX-CMV-GFP-PSK2质粒酶切鉴定图
2GFP-PSK2慢病毒的检测
不同稀释倍数的GFP-PSK2慢病毒感染293T细胞48小时后的显微拍摄图
不同稀释倍数的GFP-PSK2慢病毒感染293T细胞48小时后细胞中PSK2基因表达的实时定量 PCR 曲线图
4shRNA慢病毒基因沉默效果的检测
两种shRNA慢病毒感染5637细胞48小时后细胞中FRS2基因表达western结果
 
五、服务价格及周期
服务编号 服务项目 提供规格 价格 服务周期
RS001-1 目的基因过表达慢病毒表达质粒构建 500ng/μL, 100μL   1-2
RS001-2 目的基因沉默的shRNA慢病毒质粒构建 500ng/μL, 100μL   1-2
RS001-3 目的基因过表达慢病毒制备 108TU/mL, 1mL   3-4
RS001-4 目的基因沉默的shRNA慢病毒制备 108TU/mL, 1mL   3-4
 
六、技术服务流程
1. 用户下载并填写慢病毒包装技术服务协议书,发送至service@morecell.com.cn
2. 双方确认并签订技术服务协议书,按照协议内容进行技术服务。

七、客户须知
1. 如客户所需包装的目的基因由客户提供,客户提供需过表达或沉默的基因/蛋白相关信息(包括基因名称、NCBI编号、CDS区序列、目的基因所在载体图谱、酶切位点、测序结果等等);
2. 客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

八、交付结果
1. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒表达质粒(≥500ng/μL100μL
2. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒溶液(≥108TU/mL1mL);
3. 阴性对照慢病毒溶液(≥108TU/mL1mL
4. 完整的实验报告。