稳转细胞系构建技术服务项目
一、服务概述
        稳转细胞系是指在细胞中持续稳定表达特定基因或沉默特定基因表达。构建稳转细胞系的基本原理是用转染质粒或病毒感染的方法将构建好的含外源DNA的载体导入细胞,根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行选择性筛选,得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定沉默特定基因表达的细胞系。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。
        目的蛋白的过表达或沉默往往是硏究该基因/蛋白功能的常规手段。在基因功能的研究中,基因是否有效转染靶细胞,是功能研究的前提条件之一。而稳定表达细胞系则弥补了瞬时感染(或转染)中外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。
        此外,目的蛋白如重组抗体、细胞因子等的过表达细胞系可用于该目的蛋白的大量生产。
        默赛尔生物有着多年构建稳转细胞株的经验,已在多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。 

二、服务内容
1. 基因过表达、沉默等科研用稳定细胞系的构建;
2. 重组抗体、细胞因子等生产蛋白用稳定细胞系的构建。

三、服务优势
1. 拥有成熟的稳转细胞系筛选平台,技术多样化,并且可以结合客户特殊需求,灵活地定制服务。
2. 对外源基因表达进行严格鉴定,有多种检测方法:q-PCRRT-PCRWestern blotimmunofluorescenceELISAFACS
3. 质量保证:稳转细胞系无细菌、真菌及支原体污染,其生长状态、活率及目的蛋白表达水平可长期保持稳定。

四、服务示例(以PSK2基因过表达CHO稳转细胞系为例)
1PSK2基因慢病毒表达质粒构建
 
PSK2基因慢病毒表达质粒pLVX-CMV-GFP-PSK2构建
2 pLVX-CMV-GFP-PSK2质粒酶切鉴定图
2)多克隆稳定细胞株筛选及鉴定
 
3 G418筛选的GFP-PSK2稳定表达的多克隆CHO细胞系
 
野生型CHO细胞(WT-CHO)与GFP-PSK2稳定表达的多克隆CHO细胞中PSK2蛋白表达的WB检测图
3)单克隆稳定细胞株筛选及鉴定
5 G418筛选的GFP-PSK2稳定表达的单克隆CHO细胞系
 
野生型CHO细胞(WT-CHO)与GFP-PSK2稳定表达的单克隆CHO细胞中PSK2蛋白表达的WB检测图
 
五、服务价格及周期
服务编号 服务项目 价格 服务周期
RS004-1 目的基因过表达慢病毒表达质粒构建   1-2
RS004-2 目的基因沉默的shRNA慢病毒质粒构建   1-2
RS004-3 目的基因过表达慢病毒制备   3-4
RS004-4 目的基因沉默的shRNA慢病毒制备   3-4
RS004-5 宿主细胞抗生素筛选浓度确认   1-2
RS004-6 多克隆稳定细胞株筛选及鉴定   5-6
RS004-7 单克隆稳定细胞株筛选及鉴定   7-8
 
六、技术服务流程
1. 用户下载并填写稳转细胞系构建技术服务协议书,发送至service@morecell.com.cn
2. 双方确认并签订技术服务协议书,按照协议内容进行技术服务。

七、客户须知
1. 客户提供需过表达或沉默的基因/蛋白相关信息;
2. 客户提供需稳转的宿主细胞系。

八、交付结果
1. 含目的基因序列或基因沉默shRNA序列的慢病毒表达质粒(4ug)和相应的慢病毒(1mL)
2. 多克隆稳定细胞系或单克隆稳定细胞系(干冰运输或活细胞培养);
3. 完整的实验报告。